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半合成生物传感器揭示辅酶A在细胞内的代谢平衡

微流控 来源:麦姆斯咨询 作者:麦姆斯咨询 2022-11-10 09:35 次阅读

辅酶A(Coenzyme A,CoA)是一种普遍存在的辅助因子,在大量的酶促反应和各种细胞过程中都需要,包括柠檬酸循环、甾醇生物合成、氨基酸代谢、酮体生产和脂肪酸代谢。CoA浓度调节细胞代谢,或作为底物或变构调节剂。组蛋白和其他蛋白质与酰基CoA的翻译后修饰控制着大量蛋白质的命运。因此,CoA水平的失调会导致各种病理。然而目前仍缺乏一种测量CoA在活细胞中的浓度的方法。

据麦姆斯咨询报道,近期,中国科学技术大学薛林团队与德国马克思普朗克医学研究所Kai Johnsson团队在Nature Chemical Biology杂志在线发表题为“Probing coenzyme A homeostasis with semisynthetic biosensors”的研究论文,该研究开发了第一个用于测量哺乳动物细胞不同细胞器CoA水平的生物传感器。并提出了CoA生物合成的细胞图,以提示细胞溶质和线粒体如何维持CoA池。

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辅酶A(Coenzyme A,CoA)是新陈代谢的核心辅助因子之一。在真核生物中,CoA是由半胱氨酸、ATP和必需营养素泛酸盐合成的,泛酸盐也被称为维生素B5。泛酸在第一步被泛酸激酶(pantothenate kinase,PanK)磷酸化为4'-磷酸腺苷酸(4′-phosphopantothenat,PPan),随后被磷酸腺苷酰半胱氨酸合成酶(phosphopantothenoylcysteine synthetase,PPCS)和磷酸腺苷酰半胱氨酸脱羧酶(phosphopantothenoylcysteine decarboxylase,PPCDC)转化为4'-磷酸腺苷酸(4′-phosphopantetheine,PPanSH)。双功能CoA合成酶(CoA synthase,COASY)通过浓缩PPanSH和AMP,将PPanSH转化为去磷辅酶A (dephosphocoenzyme A,dPCoA),然后将dPCoA磷酸化形成CoA。此外,哺乳动物和其他真核生物拥有一种单功能去磷辅酶A激酶(dephosphocoenzyme A kinase,DCAKD),它也催化辅酶A生物合成的最后磷酸化步骤。

CoA的浓度在亚细胞间室中不同,包括细胞质、线粒体和过氧化物异构体。据报道,线粒体CoA池是最大的,包含了肝、心脏和肌肉细胞中总CoA的80-95% 。然而,不同的亚细胞CoA池是如何被调节的还不清楚。要回答这个问题,定量亚细胞CoA水平的方法是必不可少的。目前测定辅酶A的方法是基于色谱法、质谱法或酶法。它们需要溶解细胞或分离的线粒体,因此只能提供有限的亚细胞浓度信息

在这项研究中,研究人员介绍了第一个测量活细胞中游离辅酶A浓度的半合成生物传感器。该半合成生物传感器是通过工程GFP-HaloTag融合蛋白与荧光配体的特异性标记生成的。通过调整CoA和栓系配体的结合蛋白的相对亲和力,可以合理地将传感器的灵敏度提高两个数量级以上。它的读数基于CoA依赖的Förster GFP和荧光配体之间的共振能量转移效率的变化。这种调优对于CoA传感器在不同细胞间隔中的使用非常重要,也确认了生物传感器的设计原则。CoA传感器具有对CoA的高选择性,对pH的变化相对不敏感。比率读数允许比较CoA在不同条件下和不同亚细胞间室的相对浓度。

利用这种生物传感器,研究人员探测了哺乳动物细胞中参与CoA生物合成和运输的众多蛋白质的作用。并首次提供了不同细胞系中游离胞质和线粒体[CoA]的绝对值。

74785f0c-6094-11ed-8abf-dac502259ad0.pngCoA半合成生物传感器揭示CoA的代谢平衡

综上所述,这项研究描述了一种用于测量活细胞中游离胞质和线粒体[CoA]的生物传感器,并应用该传感器回答有关CoA稳态的核心问题。未来期望CoA传感器将成为研究CoA在代谢中的作用的重要工具。

论文链接: https://www.nature.com/articles/s41589-022-01172-7 审核编辑 :李倩


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原文标题:半合成生物传感器揭示辅酶A在细胞内的代谢平衡

文章出处:【微信号:Micro-Fluidics,微信公众号:微流控】欢迎添加关注!文章转载请注明出处。

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