实验名称:超声激活血卟啉对S180肿瘤细胞表面EGFR表达量的影响
研究方向:生物医疗
测试目的:
血卟啉是从血红蛋白中提取的有机光敏剂,其本身无抗肿瘤效应,但它可以在动物和人的多种肿瘤组织优先聚集,易为声光辐射处理激活,当它被声光激活后能产生强烈的抗肿瘤效应。美国利用光激活治疗肿瘤,这种方法被称为光动力学疗法,简称PDT。光动力学疗法在临床主要应用于人体表面浅层肿瘤的治疗。光在生物组织中的穿透能力差,使其对深部肿瘤的治疗受到限制。超声联合血卟啉对小鼠移植肿瘤生长抑制有协同效应,发现单用血卟啉无抑制作用,单用超声仅有轻微抑制作用,而两者联合则有明显的抑制效果,并将之命名为声动力学疗法。超声是一种弹性机械波,其在生物组织中的穿透能力比激光强,同时超声能够聚焦于特定部位。声动力疗法对于治疗肿瘤细胞有较强的针对性,对正常组织无创伤,组织穿透力强,并且机体不产生耐受性,可以反复多次治疗,因而它对于治疗肿瘤,特别是组织深层肿瘤有着较好的应用前景。有学者认为SDT杀死或抑制肿瘤细胞的部分机理是通过超声的热效应来实现的,但是大量的实验结果提示,SDT可能更主要地与超声激活聚集在癌组织的血卟啉产生单线态氧有关。
测试设备:ATA-8202射频功率放大器、昆明系小白鼠、艾氏腹水肿瘤细胞系、超声探头、血卟啉衍生物为单羟乙基单乙烯基次卟啉、细胞色素c和Bax单克隆抗体、caspase-3单克隆抗体、链霉卵白素SP试剂盒。
实验过程:
接种:S180腹水瘤细胞于6只小鼠腹腔1周后,随机取3只小鼠,抽取腹水细胞,分别置于医用薄壁试管,加入RPMI1640+10%小牛血清培养基中,于37℃孵箱培养,实验时用生理盐水调整细胞浓度至2x106个/ml。每只小鼠抽取的腹水细胞分为12管,分为四组,分别为对照组(CT)、血卟啉组(H)、超声组(U)和超声加血卟啉组(UH),每组三管,每管0.5ml细胞悬液。H组和UH组每管中加入血卟啉4ul,使其终浓度为0.01mg/ml,37℃CO2孵箱孵育,45min后U组和UH组分别在频率为1.8MHz,强度为2W/cm2的超声装置中声照处理3min,各实验组分别于声照后1h、3h、5h取材,常规细胞涂片。
免疫组织化学染色:以SP法进行免疫组织化学染色:细胞涂片固定后加3%过氧化氢处理15min,除去内源性酶PBS洗3次,加正常动物血清30min以减少非特异性染色,加EGFR一抗4℃过夜,PBS代替一抗作为阴性对照。SP染色按试剂盒说明进行,DAB显色,梯度酒精脱水,中性树胶封固盖片。
阳性结果观察:各组随机选取10个高倍视野,利用数码显微成像系统进行图像采集和分析。ImagePro-Plus5.0图像分析软件测定各组照片的平均光密度OD值(0~255)(用平均光密度表示阳性细胞表达强度,平均光密度值越大则表达越强)。组间t检验显示组间差异。
实验结果:
由表中数据可以看出,超声激活血卟啉处理1h后,UH组、U组平均光密度值明显低于CT组、H组,且UH组平均光密度值低于U组,经组间t检验,UH组与其它组差异极显著(p<0.01);超声激活血卟啉处理3h后,uh组平均光密度值小幅度下降,ct组、h组基本无变化,u组平均光密度下降。
表1EGFR在超声处理1h、3h、5h后平均光密度值比较(*10-2)
图1EGFR在超声处理1h、3h、5h后平均光密度值比较(*10-2)
安泰ATA-8202射频功率放大器:
本文实验素材由西安安泰电子整理发布。西安安泰电子是专业从事功率放大器、高压放大器、功率信号源、前置微小信号放大器、高精度电压源、高精度电流源等电子测量仪器研发、生产和销售的高科技企业。Aigtek已经成为在业界拥有广泛产品线,且具有相当规模的仪器设备供应商,样机都支持免费试用。
审核编辑黄宇
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