泵、色谱柱及检测器是HPLC的三大关键组成部分。样品经色谱柱分离后随流动相共同进入检测器,检测器将样品的物理或化学信号转换为电信号,得到样品组分分离的色谱图。
HPLC检测器分为溶质型和总体检测器两类。总体检测器对色谱柱中全部流出物的特性产生响应(包括样品及流动相),如示差折光检测器;而溶质型检测器只对待测样品的物理化学特性产生响应,例如紫外检测器。
紫外-可见吸收检测器 (ultraviolet-visible detector, UVD)
UVD适用于对紫外或可见光有吸收的样品,分为固定波长和可调波长型两类。UVD灵敏度高,线性范围宽,对流速和温度变化不敏感,可用于梯度淋洗。
光电二极管阵列检测器 (photodiode array** d**etector, PDAD/DAD/PDA/PAD)
原理与UVD相同,区别在于PAD可检测到所有波长的吸收值,是全扫描光谱图。PAD的优点是可以获得样品组分的全部光谱信息。
荧光检测器 (fluorescence detector, FLD)
FLD适用于具有荧光的样品,一定条件下,荧光强度与物质浓度成正比。FLD灵敏度和选择性好,检出限高,缺点是适用范围具有局限性。
示差折光检测器 (refractive index detector, RID)
RID是基于通过测定色谱柱流出物导致的光折射率的变化,来测量样品的浓度。根据原理RID分为偏转式和反射式两种。RID是一种通用型检测器,但其对温度及溶剂组成变化敏感,不能用于梯度淋洗。
电化学检测器 (elctrochemical detector, ED)
ED包括介电型、电导型、电位型和安培型四种。介电型通过测定介质介电常数的变化来测定样品浓度,电导型通过测定样品电离导致介质电导率的变化,电位型通过测定电流为零时电极之间电位的差值,安培型通过测定特定电位下电流的差值来测定样品的浓度。安培型电化学检测器相对于电位型应用要更为普遍。
蒸发光检测器 (evaporation light-scatter detector, ELSD)
ELSD是基于光线通过微小的粒子会产生光散射现象的原理。样品经色谱柱分离后会被氮气喷为雾状液滴,云雾状溶质颗粒通过光路后产生光散射。ELSD要优越于RID,灵敏度及检出限高,对温度敏感程度低,适用于梯度淋洗。
质谱检测器 (mass spectrometry detector, MSD)
MSD灵敏度高,专属型强
评价液相色谱检测器有一些共同的性能指标,例如噪声、漂移、灵敏度、检测限、线性范围等。
- 噪声 :检测器输出的与待测样品无关的波动信号
- 漂移 :基线随时间推移向上或向下偏离
- 灵敏度 :一定量物质通过检测器所产生响应值的大小
- 检测限 :产生可辨认样品峰所需的最低样品量
- 线性范围 :检测器的响应值与样品量保持线性关系的样品量范围值
- 死体积 :由样品池体积及样品池到色谱柱连接管路体积两部分组成
- 响应时间 :检测器跟踪样品组分浓度变化的快慢程度
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