液相色谱仪操作及原理

　　液相色谱仪概述

　　液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（zui高输送压力可达4.9107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

　　一、特点：

　　1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。

　　2.高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h。3.：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。

　　4.高灵敏度：液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。

　　5.适应范围宽：气相色谱法与液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75%～80%）原则上都可应用液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。

　　二、性质及原理：液相色谱按其固定相的性质可分为凝胶色谱、疏水性液相色谱、反相液相色谱、离子交换液相色谱、亲和液相色谱以及聚焦液相色谱等类型。用不同类型的液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。

　　液相色谱仪操作及原理

　　液相色谱仪伴随分析测定的需求功能不断提升，与经典液相色谱柱装置相比拥有了更智慧化的操作系统，稳定性能提升，灵敏度、可靠性能加强，用于食品检测、化工分析、环境监测、药物分析等多领域。

　　一、液相色谱仪运行原理简述

　　可将“液”“固”两种状态下的液体混合物进行先分离后鉴定的仪器。

　　注：此先分离后鉴定的方法适用于“液-液色谱（LLC）”及“液-固色谱（LSC）”两种状态混合物。

　　液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。另外，科捷仪器液相色谱仪配套产品有六通进样阀、自动进样器、超声波清洗器、色谱柱温箱、在线脱气机、溶剂过滤器、真空泵、液相色谱柱等。

　　二、液相色谱仪操作五步骤

　　1、准备

　　1.1.准备所需流动相，用合适的0.45滤膜过滤，超声脱气20min。

　　1.2.根据待测样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）和定量环。

　　1.3.配制样品的标准溶液，用合适的0.45um滤膜过滤

　　1.4.检查仪器各部件是否连接正常，其中包括电源线、数据线、地线以及输液管道

　　2、开机

　　2.1.接通电源，一次打开检测器、输液泵，待检测器自检结束，显示测量状态时再打开电脑、打印机及电脑显示器等。

　　2.2.更换流动相并排气泡。

　　2.3.将管路的不锈钢过滤头放入装有准备好的流动相储液瓶中

　　2.4.逆时针转动泵的排空阀，约半圈，之后拧松排空阀

　　2.5.按输送泵（purge）键，绿灯亮时开始以5.0ml/min流速冲洗约2分钟，管路无气泡时按下（stop）键，重新设定流速值。

　　3、设计参数

　　3.1.流速设定

　　3.2.波长设定

　　3.3.设定完成按运行（run）按键

　　3.4.色谱工作站操作：依次执行→打开“在线工作站”→“通道1”→“OK”→“数据采集”后进行零点校正、查看基线，确定基线稳定后关闭查看基线可以进样。

　　进样后进行采集、预览、查看结果、打印

　　4、进样

　　4.1.进样前将（A/Z）检测器按键调零查看基数是否在0mv，有偏差则（零点校正）按键进行调试

　　4.2.用样品清洗注射器、排除气泡、抽取适量后将手动进样阀杆调到（Load）位置，样品注入进样阀后调到（Inject）位置，以此进样操作步骤完成，进入在线工作站自动采集数据流程。

　　5、系统清洗

　　由于分析样品时流动相系统中含有缓冲盐类物质，需使用10%甲醇水溶液，以1.0ml/min冲洗40分钟后更换甲醇试剂，以同样1.0ml/min冲洗40分钟，（stop）按键停泵，关机。

　　三、液相色谱仪工作原理

　　首先，流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内。由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。液相色谱仪也常以吸附柱色谱法、分配柱色谱法、离子交换柱色谱法、凝胶柱色谱法，四类根据工作原理命名的色谱法来区分。

责任编辑：YYX