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蜡梅花cDNA文库构建及其高频出现脂转移蛋白cDNA的表达
摘要：【目的】构建蜡梅花cDNA 文库，分析蜡梅脂转移蛋白基因的表达，为探索蜡梅冬季开花分子机理，分离克隆特色基因奠定基础。【方法】以蜡梅花器官为材料，用SMART cDNA Library Construction Kit 构建文库，RT-PCR 分析基因表达。【结果】经测定原始文库滴度达到1.4×106 pfu/ml，扩增总文库滴度约为1010pfu/ml，重组率达到96%，插入片段在0.5 kb 以上，平均约1.1 kb，通过PCR 检测，从总文库中检测到了表达丰度不同的蜡梅PI、AP3 和LTP 基因的特异片段，说明所构建的文库覆盖度高、代表性强，LTP 基因具有内含子，而总文库中扩增出的LTP 基因不含内含子，说明所构建的cDNA 文库无基因组DNA 污染， LTP 基因在蜡梅开花各个时期均表现较高的转录水平，与EST 分析时高频率出现LTP 序列的情况相符，证实所构建的文库能够反映蜡梅开花过程基因表达的基本情况。【结论】已获得高质量的蜡梅花cDNA 文库，可以用于进一步的基因克隆或EST 测序分析，这是首次正式报道蜡梅cDNA 文库的构建。LTP 基因在蜡梅开花过程中可能具有重要的生物学功能，为探索蜡梅冬季开花分子机理提供了线索。
关键词：蜡梅；cDNA 文库；脂转移蛋白基因；RT-PCR
摘要：【目的】构建蜡梅花cDNA 文库，分析蜡梅脂转移蛋白基因的表达，为探索蜡梅冬季开花分子机理，分离克隆特色基因奠定基础。【方法】以蜡梅花器官为材料，用SMART cDNA Library Construction Kit 构建文库，RT-PCR 分析基因表达。【结果】经测定原始文库滴度达到1.4×106 pfu/ml，扩增总文库滴度约为1010pfu/ml，重组率达到96%，插入片段在0.5 kb 以上，平均约1.1 kb，通过PCR 检测，从总文库中检测到了表达丰度不同的蜡梅PI、AP3 和LTP 基因的特异片段，说明所构建的文库覆盖度高、代表性强，LTP 基因具有内含子，而总文库中扩增出的LTP 基因不含内含子，说明所构建的cDNA 文库无基因组DNA 污染， LTP 基因在蜡梅开花各个时期均表现较高的转录水平，与EST 分析时高频率出现LTP 序列的情况相符，证实所构建的文库能够反映蜡梅开花过程基因表达的基本情况。【结论】已获得高质量的蜡梅花cDNA 文库，可以用于进一步的基因克隆或EST 测序分析，这是首次正式报道蜡梅cDNA 文库的构建。LTP 基因在蜡梅开花过程中可能具有重要的生物学功能，为探索蜡梅冬季开花分子机理提供了线索。
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