资料介绍
细胞生物学家往往需要将外源分子送入细胞进行研究,比如质粒DNA或siRNA。化学试剂、电穿孔和病毒递送系统是目前最常用的三种途径。
递送方法的选择主要取决于目标细胞的类型,需要递送的分子,以及研究所需的转染效率。“人们用得最多的是最简单的方法——化学转染,”Mirus+Bio公司的Josh+Snow说。
化学转染试剂旨在减少细胞对核酸的排斥(二者都带负电荷),促使细胞膜通过胞吞、胞饮或融合摄入外源物质。对于容易培养和转染的细胞系来说,传统的化学和物理转染(如电穿孔)就已经足够了。不过化学试剂往往对细胞有毒,转染原代细胞、干细胞或者其他难转染细胞的效率也比较低。虽然病毒递送对许多细胞类型的效率很高,但使用起来比较麻烦,还需要采取特殊的防护措施,对操作者的专业要求也比较高。
除此之外,人们还在探索全新的转染方法。这篇文章,特别对激光转染方式、转染产品和方法进行了详细的介绍。
GNOME(金纳米颗粒介导的激光转染)
Leibniz+University+Hannover%2C+Germany
GNOME转染方案主要是通过短脉冲激光,在细胞膜上刺出微小的孔洞,使细胞外的分子能够扩散进入细胞质。研究者们尝试这一策略给细胞递送分子已经有十多年了,但传统方案的速度非常慢通量也很低。
Dag+Heinemann及其同事首先将细胞与直径约200+nm的金纳米颗粒共同孵育,让它们慢慢沉积到细胞上。三个小时之后,研究者们用短脉冲的绿色激光束照射样本。这一过程在研究者自制的自动化设备中进行,该设备带有能够移动培养皿的自动载物台和软件,以便快速照射样本。
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